PCR—ELISA方法在转基因大豆检测中的应用

在当前生命科学发展过程中，转基因技术的出现可谓是一个划时代的事件，并广泛的在生命科室的各个方面进行应用。转基因生物技术及其产业化在二十世纪末开始出现，其有效的推动了农业、医药卫生等行业的发展。但在近年的科学研究过程中发现，转基因生物技术的应用会带来一些潜在的危害。由于转基因生物产品中含有有毒物质和过敏源，会影响人体的健康。同时转基因生物体还会对自然生态环境带来较在的影响。转基因生物体属于新的物种，其存在可能会对自然演化的原有自然生态物种带来一定的破坏，从而导致自然生态物种的失衡。但转基因生物具有传统生物所无法比拟的优点为，而且具有较深远的科学和经济潜力，但由于转基因产品的安全性还没有一个较为明确的定论，所以人们对转基因检测技术越发关注。 1 转基因大豆检测方法 对于转基因大豆的检测方法，国外在很早以前就对此开展了深入的研究，而且其转基因检测也具有国际通用性，所采用的主要检测技术以PCR和Southern杂交分析法，ELISA法和RFLP，核酸序列分析等。 但在当前所采用的转基因大豆检测方法中，无论是PCR检测技术，还是RFLP、核酸序列分析、ELISA法检测技术等都存在着自身的局限性和不足之处，尽管部分技术能够高效快速的进行检测，但却在检测过程中容易出现假阳性的状态，在检测过程中的灵敏度和可靠性需要进一步提高。部分检测技术中，对于批量和自动化检测具有不适用性，而且部分检测技术所使用的仪器价格较高，这就制约了其应用，而且在短期内也不能进行广泛普及。 我国作为唯一的非转基因大豆主产国，特别是黑龙江省，更是具有种植转基因大豆的净土，所以黑龙江省建立起了非转基因大豆的保护区，用于生产绿色的非转基因大豆，这可以有效的实现对黑龙江省大豆种植方面的传统优势进行有效的保护，更好的推动其发展。因此为了更好的发展黑龙江省大豆种植方面的优势，则需要选择一种易于操作及能够大批量检测大豆的方法具有必要性。 目前在对转基因大豆进行检测过程中，PCR法是应用最为广泛的方法，其可以针对所有转基因产品进行检测，但在具体分析过程中有可能会有假阳性现象发生。而ELISA检测作为一种蛋白检测方法，其具有较强的特异性，但却无法检测到不表达目的基因。这二种方法都存在着各自的优缺点，所以在对转基因大豆检测过程中可以有效的将这两种方法有效的结合起来，使其在检测过程中能够相互补充，确保实现良好的检测效果。 2 PCR—ELISA方法在转基因大豆检测中的应用特点 半定量检测 PCR扩增过程中，如果把标准阳性样品的不同浓度值作为参照，以不同浓度下的吸光值绘出与转基因含量的标准曲线图，以此可以确定检测样品的转基因含量，即可以进行半定量检验。 灵敏度高 利用PCR—ELISA法对大豆进行检测时，在PCR检测完成后，可以利用探针与管壁上的固相产物进行杂交，从而有效的确保检测的特异性的提升。在PCR扩增过程中的非特异性产物基本上不可能与探针产生互补，通过紫外分光光度计和酶标仪来判定结果，并利用数字的形式进行输出，有效的将PCR的高效性与ELISA的高特异性有效的结合在一起，从而达到较高的灵敏度，使其达到欧盟的具体要求。利用PCR技术在对转基因大豆进行水平测试时，检测的灵敏度能够达到百分之二左右，而利用PCR-ELISA方法对转基因大豆进行检测时，灵敏度会比欧盟利用PCR检测方法进行检测时提高五至十倍。而且利用凝胶电泳对液相产物进行检测时，可以有效的避免假阳性现象的产生，而且检测方法较为简便、快捷，在对大样品进行检测时具有较好的适应性，有利于检测效率的提升。 可靠性 PCR—ELISA是一种PCR高效性与ELLSA高特异性结合在一起的转基因检测方法，利用共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物，在Taq酶作用下，以目标核酸为模板进行扩增，产物一部分为固相产物，一部分为液相产物。对于固相产物，可用标记探针与之杂交，再用碱性磷酸酯酶标记的链亲和素进行ELISA检测，同时可通过凝胶电泳对液相产物进行分析。这样，两次检测有效地避免了假阳性的出现，提高了检测结果的可靠性。国际上对转基因的检测普遍定位于3种基因，即35S启动子，NOS终止子和NPTII基因，如检不出视为非转基因，只要检出其中一种即为转基因。 3 结束语 当前针对于转基因农产品，各国都开展了鉴定技术，我国也初步建立了转基因检测标准体系。由于我省农业具有自身的特点，所以需要加大对大豆转基因成分的鉴定和检测，加大对绿色农产品的监测力度。利用PCRELISA方法对转基因大豆进行检测具有较好的高效性和可性，可以直接实现对大批量的产品进行鉴定。

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